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Histo-Clear II量化使用手冊
一.脫水后透明
l Histo-Clear II的透明時間可以延長至2-4小時達(dá)到更好的透明效果并且不用擔(dān)心標(biāo)本變硬變脆。
l 37℃比常溫25℃更易于組織塊的脫水后透明并且節(jié)省試劑的用量和處理的時間。
l 在Histo-Clear II透明前還可以增加無水異丙醇步驟(去除痕量水)從而減少Histo-Clear II的用量。
l 一般來說2.5L-3L Histo-Clear II可以處理1250-1500個組織塊,具體數(shù)量可能視組織塊的大小厚薄而發(fā)生變化,各實驗室可在這個基礎(chǔ)上摸索出適合自己的處理通量。
l 達(dá)到試劑處理量上限時應(yīng)及時更換,更換可以采用前移法,大程度增加透明劑的利用度和保證組織處理的效果。所謂前移法是指,通常的脫水后透明含有三道Histo-Clear II透明處理,當(dāng)一道Histo-Clear II達(dá)到處理上限時,將一道透明劑溶液棄去,后續(xù)的兩道透明劑溶液依次前移,而在后一道換上新鮮的透明劑。
二.脫蠟
l Histo-Clear II的脫蠟時間視溫度和組織切片的類型厚薄(3μm or 4μm)而定,一般來說室溫25℃時,2-3道脫蠟總時長在10min-50min可以保證脫蠟完全。
l 以4μm切片為例,500ml Histo-Clear II大致可以處理700張片子左右,更細(xì)化的數(shù)字還需視各實驗室的具體情況而定。**通過預(yù)實驗掌握Histo-Clear II對自己工作中所使用的石蠟的溶解速率,從而科學(xué)的量化每道Histo-Clear II的使用體積、處理時間以及更換的時機。
l 更換同樣可以采用前移法來節(jié)省用量。
三.染色后透明
與脫蠟基本類似也受溫度、切片厚薄等因素影響,一般2-3道,每道5-10min。以4μm切片為例,500ml Histo-Clear II大致可以處理750張片子左右,具體處理量可以自己摸索后確定。更換仍然可以采用前移法,既不影響透明效果也可以節(jié)省試劑用量。